Todas las entradas por Tybalt Cyrano

I'm an experimental musician, a poor graphic designer and a mad scientist. I'm continuously fighting with my human nature. La verdad soy una persona como cualquier otra, para qué te voy a mentir.

AISLAMIENTO Y DERIVATIZACION DE CAFEINA

EXTRACCIÓN DE CAFEÍNA

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Técnica:

Colocar en un Erlenmeyer de 250 ml, 5,5 gr. de Na2CO3 y 50 ml de agua. Calentar la mezcla hasta disolución con llama suave. Mantener tapado con un vidrio de reloj mientras se calienta sobre tela metálica. A esa solución agregar 3 gr de té en hebras y mantener el calentamiento durante treinta minutos más, sin destapar. Dejar enfriar hasta 40-50° C y filtrar la solución por gravedad con torunda de algodón. Lavar el residuo con dos porciones de 5 ml de agua caliente. Descartar el sólido y dejar enfriar el filtrado a temperatura ambiente y extraer la solución acuosa con tres porciones de 15 ml de Cl3CH (no agitar demasiado para evitar la formación de emulsiones). La fase orgánica se seca con Na2SO4 anhidro, se filtra y se destila el solvente. Realizar una TLC frente a cafeína, teofilina y teobromina como testigos.

DERIVATIZACIÓN DE CAFEÍNA: OBTENCIÓN DEL SALICILATO DE CAFEÍNA

Técnica:

Pesar 50 mg de cafeína y 37 mg de ácido salicílico, disolverlos en 4 ml de tolueno y calentar en baño de agua. Agregar gota a gota 1 ml de éter de petróleo y permitir que la mezcla se enfríe y cristalice. Si es necesario enfriar en baño de hielo. Filtrar al vacío los cristales, secar y determinar el punto de fusión.

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Reacción en cadena de la polimerasa

Es una técnica que permite duplicar un número ilimitado de veces un fragmento de ADN en un tubo de ensayo. Mediante esta técnica pueden generarse millones de moléculas idénticas, a partir de una molécula de ADN. Esto se puede conseguir en unas horas. La reacción es muy sencilla, necesita cantidades de ADN muy pequeñas y sólo se precisa un tubo de ensayo, algunos reactivos, una fuente de calor y unas pequeñas cadena de nucleótidos que actúan como cebadores. 

La reacción es un proceso cíclico:

La molécula de ADN que va a copiarse se calienta para que se desnaturalice y se separe las dos hebras.

Cada una de las hebras es copiada por la ADN-polimerasa. (Se utiliza la ADN-polimerasa de una bacteria que vive en aguas termales, Thermus aquaticus, así la enzima puede trabajar a altas temperaturas).

Las cadenas recién formadas son separadas de nuevo por el calor y comienza otro nuevo ciclo de copias. Estos ciclos se repiten hasta que se obtiene el número de copias deseado.

 

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Cada ciclo dura aproximadamente 5 minutos y para conseguir una cantidad útil se requieren al menos 20 ciclos de reacciones. Se realiza de forma automática en un aparato como se ve en la fotografía, con lo que se consigue un clonaje rápido en un sistema libre de células. Las dos hebras se separan, en cada hebra se fija una pequeña cadena de nucleótidos (el cebador o promotor), que se fija sobre una parte concreta del ADN y a continuación empieza el proceso de la replicación. En unos segundos se completa el ciclo, y de un trozo de ADN, tenemos ya dos cadenas.

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APLICACIONES DE LA PCR

  1. Secuenciación

Una de las razones mas comunes para el uso de la PCR es la formación de suficiente cantidad de ADN molde para su secuenciación. Es mucho mas sencillo y rapido que la clonación en células.

  1. Estudios evolutivos

Mediante la PCR se pueden amplificar genes de organismos ya extinguidos, como del mamut, o restos antiguos humanos. Se pueden comparar estos genes con los genes semejantes de organismos actuales y poder reconstruir árboles filogenéticos. El PCR también se ha utilizado para conseguir el mapa del genoma humano.

  1. Huellas dactilares del ADN.

La determinación de las huellas dactilares genéticas constituye una de las aplicaciones mas interesantes de la PCR. Mediante esta técnica es posible comparar muestras diferentes de ADN para comprobar si pertenecen al mismo individuo o no, o si existe parentesco entre ellas. Esta técnica se aplica actualmente en Medicina forense e investigaciones policiales, con el fin de identificar indiividuos a partir de muestras biológicas, como sangre, semen, piel o cabellos. También se utiliza en las pruebas de paternidad.

 

LINKS

http://www.nobelprize.org/nobel_prizes/chemistry/laureates/1993/mullis-lecture.html

http://www.arrakis.es/~ibrabida/vigpcr.html

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2288446

Síntesis de para-acetaminofeno (paracetamol)

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En un Erlenmeyer de 100 mL se pesan 1,05 g (9,5 mmoles) de p-aminofenol y se añaden, primero, 18 mL de agua, y luego 0.75 mL de ácido clorhídrico 12 M, con agitación para que se disuelva totalmente el clorhidrato de la amina formado, añadiendo, si es necesario, alguna gota más de ácido clorhídrico.Si el fenol contiene impurezas (fácilmente reconocibles por su color oscuro), deben eliminarse por tratamiento de la solución caliente con carbón activo, seguido por filtración en filtro de pliegues.

Se prepara la disolución tampón necesaria para la acetilación, disolviendo 1,25 g de acetato sódico trihidrato en 4 mL de agua, y se añade, de una vez y con agitación, a la disolución templada del clorhidrato de la amina (40-50 oC). Se añaden rápidamente 1,0 mL de anhídrido acético, manteniendo la temperatura y la agitación vigorosa durante 10 minutos.

Transcurrido ese tiempo se enfría la disolución introduciéndola en un baño de agua-hielo, mientras se agita con una varilla de vidrio, hasta que comienza la cristalización del paracetamol. A veces es necesario rascar un poco cerca de la superficie de la disolución para que comience la cristalización. Una vez iniciada la misma, se mantiene en el baño de agua-hielo durante unos 20 minutos, para asegurar que cristaliza todo el compuesto.

El paracetamol bruto se filtra a vacío con el Büchner, y los cristales obtenidos se dejan secar al aire. Se recristaliza de agua una muestra y se miden los p.f. del bruto de reacción y del producto recristalizado, guardando cada uno de ellos en un vial convenientemente etiquetado.

 

FUENTE: PRÁCTICAS DE QUÍMICA ORGÁNICA I (Curso 2013-2014)

Nociones sobre seguridad (resumen)

Los alumnos deberán conocer dónde se encuentran los dispositivos de seguridad y su uso en caso de accidente:

  • Salidas
  • Lugar para lavarse los ojos
  • Extintores para fuego
  • Ducha de emergencia
  • Botiquín de primeros auxilios

Al ocurrir un incidente el alumno deberá informar inmediatamente al docente responsable del trabajo práctico. Igualmente, es importante que conozca lo que se debe hacer de primera intención para auxiliar, en caso de ser necesario.

El uso de guardapolvos es obligatorio y se recomienda llevar calzado cerrado que cubra todo el pie y el cabello largo recogido.

El orden de la mesada, de las campanas y del laboratorio en general es fundamental para evitar accidentes. El área de trabajo debe mantenerse limpia y ordenada.

Los productos químicos derramados deben limpiarse inmediatamente y todo el material de vidrio debe lavarse luego de su uso.

Nunca debe forzarse un tubo de vidrio, ya que en caso de ruptura, puede provocar un corte grave. No debe tocarse material de vidrio caliente, para prevenir quemaduras.

 

Ingestión

No comer ni beber alimentos en el laboratorio.

No fumar.

No inhalar ni probar jamás un compuesto químico.

No pipetear directamente con la boca. Usar pera de goma o propipeta.

Lavarse las manos una vez finalizada la actividad de laboratorio.

 

Protección de la piel

No tocar con las manos ningún compuesto químico.Utilizar guantes protectores durante el trabajo práctico, excepto al tener el mechero encendido.

 

Protección de los ojos

Llevar puestos anteojos de seguridad siempre que se permanezca en el laboratorio, aunque se usen anteojos recetados. Si se usan éstos, tenga presente que no otorgan una protección adecuada. Los anteojos de seguridad usuales (especialmente de plástico) cansan rápidamente los ojos debido a su incomodidad y a su escasa transparencia. Si dedica muchas horas de trabajo en el  laboratorio es conveniente adquirir anteojos hechos a medida, montados con vidrios de seguridad.

Los lentes de contacto no son una protección eficaz del ojo; es más, en caso de accidente pueden aumentar el daño causado al ojo. Se recomienda que no se utilicen los lentes de contacto en el laboratorio, o que en el caso de usarlos, emplear anteojos de seguridad.

No debe nunca mirar directamente hacia el cuello de un balón que contenga una mezcla de reacción.

Evitar efectuar medidas de ácidos, álcalis, o cualquier otro material peligroso a la altura de los ojos. La probeta se debe utilizar sobre la mesada y añadir los líquidos lentamente.

 

Fuego

Utilizar la llama únicamente cuando sea imprescindible, apagándola inmediatamente cuando ya no se usa.

Se debe saber dónde están colocados los extintores y cómo se utilizan. Para combatir el fuego producido por la madera, papel o productos textiles, cualquier clase de extintor comercial resultará adecuado; mientras que para los fuegos producidos por grasas o aceites deberá evitarse el uso de extintores a base de agua, que únicamente esparcirán el material ardiente. En los fuegos producidos por instrumentos eléctricos deben usarse extintores a base de CO2 o los extintores químicos secos; en los fuegos producidos por hidruros o metales activos se utilizarán extintores químicos secos.

Para combatir un fuego, en primer lugar debe enfriarse el área cercana al fuego, rodeándose éste con el material de los extintores para prevenir que las llamas puedan propagarse; entonces se procederá a apagar la base de las llamas.

Cuando se inflaman los vestidos, no debe desplazarse a la víctima; esto avivaría todavía más las llamas; será conveniente sofocar el fuego envolviendo a la víctima en una manta, o bien se puede utilizar una chaqueta o revolcar a la víctima por el suelo si no se tiene una manta para envolverla, o también extinguir las llamas debajo de la ducha de emergencia.

 

Manejo de Productos Químicos

Tener mucho cuidado siempre que se manejen productos químicos, especialmente con aquellos que son desconocidos.

Manejar todos los reactivos que puedan producir vapores corrosivos, tóxicos u ofensivos bajo campana.Evitar el contacto directo con los productos orgánicos, usando guantes de goma cuando se manejen productos peligrosos.

Un delantal puede protegerle tan bien como sus ropas.

Manejar con cuidado los cilindros de gases comprimidos moviéndolos con una carretilla y asegurándolos en su posición cuando están en su lugar.No verter nunca disolventes en la pileta.

Tener cuidados especiales con los frascos de productos peligrosos, no someter nunca un recipiente de vidrio cerrado a un cambio térmico muy brusco; por ejemplo, no colocar un frasco comercial de metilamina en un baño de hielo seco.

No usar nunca la boca para pipetear líquidos peligrosos; debe usarse una pera de goma o una propipeta.

Cuando se trabaja con una reacción potencialmente peligrosa se utilizarán dispositivos de seguridad adecuados, pantallas protectoras, guantes, lentes, etc.

 

Primeros Auxilios

Tratamiento de las lesiones en los ojos producidas por los productos químicos

El tratamiento más importante es el que se puede aplicar a la víctima en los segundos que siguen al accidente. Este puede consistir en dirigirse al lavador de ojos u otro lugar con agua y lavar vigorosamente el ojo herido durante 15 minutos. Un lavado penetrante es particularmente necesario si la lesión ha sido producida por álcalis. Luego debe consultarse al médico.

Quemaduras producidas por el fuego y productos químicos

Las quemaduras producidas por agentes químicos de cualquier tipo deben lavarse inmediatamente con agua; el alcohol puede ser más efectivo para remover ciertas sustancias orgánicas adheridas a la piel.

Para las quemaduras producidas por objetos calientes, el agua fría con hielo es la primera ayuda más efectiva; si se aplica agua fría o bien un trozo de hielo mientras subsiste el dolor, la curación es más rápida.

Cuando se producen quemaduras muy extensas, debe colocarse la prenda más limpia que se tenga a mano por encima de las zonas quemadas para evitar el contacto con el aire, manteniendo a la víctima tendida y llamar a un médico inmediatamente.

Para prevenir el shock, siempre y cuando sea posible, se mantendrá la cabeza de la víctima más bajo que el resto del cuerpo.

No deben aplicarse ungüentos a las quemaduras graves.

 

Cortes y Heridas

Los accidentes más graves que se producen con mayor frecuencia son los cortes en la mano. Se pueden tratar corrientemente con un antiséptico y vendaje. Si el corte es muy profundo y probablemente tiene algún pedazo de vidrio, se debe consultar a un médico. Para las heridas graves, no perder tiempo. Aplicar presión directamente encima de la herida para cortar la hemorragia, usando una pieza limpia extendida por encima de la herida y presionando con la mano o con ambas manos. Si no se dispone de vendaje adecuado se cubrirá la herida con los dedos. Si se ha producido la rotura de una vena se procurará mantener la parte herida por encima del resto del cuerpo.No utilizar nunca un torniquete excepto para los casos de severa mutilación de un brazo o una pierna. Mantener a la víctima tendida para prevenir el shock, procurando que acuda rápidamente un médico.